雙歧桿菌的完整肽聚糖激活巨噬細胞的信號機制.pdf

1、　　目的：雙歧桿菌的完整肽聚糖(Whole Peptidoglycan,WPG)是雙歧桿菌發(fā)揮抗腫瘤、抗感染以及免疫賦活等多種生理功能的主要成分,它能激活機體免疫系統(tǒng)中的巨噬細胞,使其分泌多量的細胞毒性效應分子。目前對WPG激活巨噬細胞機制的認識還很膚淺。我們通過觀察雙歧雙歧桿菌的WPG對大鼠腹腔巨噬細胞PKC→NF-κB通路、PKC→ERK1/2→AP-1通路及其對細胞因子TNF-α mRNA表達的影響,探討雙歧桿菌的WPG激活巨噬細

2、胞的信號機制。
　　方法：分離培養(yǎng)SD大鼠腹腔巨噬細胞,實驗分為對照組、WPG刺激組和預孵組。(1)采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)觀察巨噬細胞內(nèi)NF-κB的核移位情況；(2)運用凝膠電泳遷移率檢測技術(shù)(electrophoretic mobility shfit assay,EMSA)分析巨噬細胞NF-κB和AP-1的DNA結(jié)合活性的變化；(3)運用免疫蛋白質(zhì)印跡(western blot)測定巨噬細胞磷酸化ERK1/2和IκBα的蛋白

3、表達水平；(4)采用半定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(RT-PCR)技術(shù)檢測巨噬細胞TNF-α mRNA的表達水平。
　　結(jié)果：(1)正常大鼠腹腔巨噬細胞NF-κB位于胞漿內(nèi)；WPG刺激巨噬細胞后,NF-κB被明顯激活,移位進入胞核,應用EMSA檢測到巨噬細胞NF-κB的DNA結(jié)合活性顯著高于對照組(P<；0.01)；應用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察到WPG刺激組巨噬細胞胞核NF-κB的陽性率明顯高于對照組(P<；0.01)；同時We

4、stern blot檢測到胞質(zhì)中IκBα的蛋白表達顯著低于對照組(P<；0.01)；但經(jīng)PKC抑制劑Chelerythrine預孵巨噬細胞后,其NF-κB的移位和DNA結(jié)合活性及IκBα的降解較WPG刺激組明顯減少(P<；0.01)。(2)未受WPG刺激的正常大鼠腹腔巨噬細胞ERK1/2處于低活性狀態(tài),給予WPG刺激巨噬細胞,其磷酸化ERK1/2的蛋白表達水平顯著高于對照組(P<；0.01),但經(jīng)PKC抑制劑Cheleryt

5、hrine預孵巨噬細胞后,其磷酸化ERK1/2的蛋白表達水平明顯低于WPG刺激組(P<；0.01)。(3)正常大鼠腹腔巨噬細胞AP-1位于胞漿內(nèi)；WPG刺激巨噬細胞后,AP-1被明顯激活,應用EMSA檢測到巨噬細胞AP-1的DNA結(jié)合活性較對照組顯著增高(P<；0.01)；經(jīng)ERK抑制劑PD98059預孵巨噬細胞后,其AP-1的DNA結(jié)合活性較WPG刺激組顯著降低(P<；0.01)。(4)TNF-α mRNA在正常靜息大鼠腹