溫針灸對兔膝骨性關節(jié)炎軟骨細胞JNK信號通路及MMP-1、13表達的影響.pdf

1、目的：觀察溫針灸治療前后 MMP-1、13的表達，以及 JNK信號通路中JNK1、2的表達情況，探討溫針灸治療膝骨性關節(jié)炎的作用機理。
　　方法：新西蘭大耳兔40只，隨機分為溫針灸組、針刺組、模型組和空白對照組，采用右后肢膝關節(jié)伸直位石膏固定法制備兔膝骨性關節(jié)炎模型。造模完成后，溫針灸組在鶴頂、內(nèi)外膝眼予以溫針灸，灸一柱；針刺組在鶴頂、內(nèi)外膝眼予以針刺，留針15分鐘，兩組均每日1次，6天為一個療程，中間休息1天，共治療2個療程；模

2、型組每天在兔架上固定15min；空白對照組不做任何干預，正常飼養(yǎng)。治療結束后取材。參考彭太平大體觀察法及 HE染色觀察膝關節(jié)組織形態(tài)學變化；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測造模前、治療前和治療后兔血清中MMP-1、13表達變化；免疫組化檢測關節(jié)軟骨中MMP-1、13的表達變化；Western Blot法檢測 JNK1、2蛋白的表達變化。所有結果均采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結果：
　　1、大

3、體觀察結果顯示模型組關節(jié)面不光滑，無光澤，有骨贅形成，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；溫針灸組關節(jié)面光滑，稍欠光澤，表面干凈，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；針刺組關節(jié)面欠光滑、欠關澤，無骨贅形成，與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　2、HE染色結果顯示：空白對照組軟骨表面光滑，結構完整，軟骨細胞排列整齊，呈四層，染色均勻；模型組軟骨變薄，軟骨細胞數(shù)量減少，可見軟骨細胞成簇排列

4、，排列紊亂；溫針灸組軟骨細胞增多，且排列整齊，軟骨邊緣光滑；針刺組軟骨稍欠光滑，軟骨細胞偶可見成簇排列，細胞數(shù)目稍增多，排列較整齊。
　　3、治療前后血清中MMP-1、13的表達水平比較：除空白對照組外，各組治療前較造模前血清 MMP-1、13的濃度均顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；治療結束后，模型組與空白對照組比較，血清 MMP-1、13表達升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；溫針灸組血清 MMP-1和MMP-1

5、3表達較模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，較針刺組有降低，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；針刺組與模型組比較，血清中MMP-1、13表達量有所降低，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4、免疫組化檢測光學顯微鏡下 MMP-1、13表達的陽性結果分布：空白對照組中MMP-1、13只有散在的陽性表達，且表達不明顯；模型組軟骨細胞著色相對較深，以棕黃色、褐色顆粒為主，且細胞外基質(zhì)中也有少量著色；溫針灸組軟骨細胞

6、 MMP-1、13的陽性表達主要以淺棕褐色的顆粒為主，表層稍有分布深褐色顆粒；針刺組的陽性表達較為明顯，而且表層與中層顏色較深的棕黃色顆粒分布較高。
　　5、免疫組化檢測關節(jié)軟骨中MMP-1、13的表達水平變化：與空白對照組比較，模型組 MMP-1、13蛋白的表達明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；溫針灸組與模型組比較，MMP-1、13的表達明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；針刺組與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義（

7、P>0.05）；針刺組與溫針灸組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　6、Western Blot檢測關節(jié)軟骨中JNK1、2的表達水平變化：經(jīng)灰度值分析，模型組軟骨中JNK1、2的表達量明顯增高，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；溫針灸組與模型組比較，JNK1、2的表達明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；針刺組與模型組比較，JNK1、2的表達下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；針刺組與溫針灸