Syncytin在小鼠失神經支配腓腸肌中的表達.pdf

1、背景與目的：運動神經元病(motorneurondisease，MND)是一組病因未明的慢性進行性神經系統(tǒng)變性疾病。運動神經元病包括肌萎縮側索硬化、進行性脊肌萎縮癥、原發(fā)性側索硬化和進行性延髓麻痹。其中肌萎縮側索硬化(amyotrophiclateralsclerosis，ALS)是最常見的運動神經元疾病，大約10％ALS病人為家族型，呈常染色體顯性遺傳。大約90％為散發(fā)型ALS，散發(fā)型ALS的發(fā)病機理不清。過氧化損傷、谷氨酸的興奮毒性

2、作用、線粒體功能障礙、蛋白錯誤折疊、神經細絲的解體和軸突轉運障礙、病毒感染機制、中毒機制、自身免疫、環(huán)境因素等可能參與ALS的發(fā)病。流行病學研究目前提出了環(huán)境因素和基因易感性聯合導致ALS的假說，其中病毒感染是一個重要的因素。
　　雖然在臨床上有證據表明ALS與脊髓灰質炎病毒、腸道病毒及逆轉錄病毒存在相關性，但是至今仍未能成功地鑒定出一種明確的ALS致病性病毒。近年來報道了ALS病人及與病人有血緣關系的健康對照組血清中存在與外源性

3、逆轉錄病毒RNA均無同源性的逆轉錄病毒逆轉錄酶RNA的表達，推測出ALS患者逆轉錄酶活性增高可能是源于激活的人基因組上的內源性逆轉錄病毒(Humanendogenousretroviruses，HERVs)。
　　Oluwole等應用實時PCR檢測了MND患者萎縮肌肉、未萎縮肌肉以及正常對照組肌肉組織中位于染色體7q21.2的HERV-Wenv即syncytin基因的表達，結果顯示萎縮肌肉組織中syncytinmRNA水平比正常對

4、照肌肉組織顯著增高，比未萎縮肌肉組織也有增高。此研究在國際上首次報道了MND組織中syncytin基因的異常轉錄，但其與MND可能的相關性及意義仍待進一步研究。
　　張偉等采用小鼠坐骨神經橫斷損傷模型，應用realtimePCR檢測神經損傷后7天腓腸肌中syncytinmRNA水平，與對照組間沒有顯著差異。為了消除手術創(chuàng)傷和神經損傷后急性炎癥的影響，本研究采用小鼠坐骨神經橫斷損傷模型，延長觀察時間，檢測坐骨神經損傷后14天失神經支

5、配的腓腸肌中syncytin的表達及定位，探討骨骼肌中syncytin的表達是否與失神經支配相關。
　　材料和方法：昆明鼠30只，隨機分為手術組+自身對照組、假手術組、正常組，每組10只，制備左側坐骨神經橫斷損傷動物模型。
　　方法：1、術前及術后1、5、9、13天測量小鼠雙下肢行走兩側足間距距離。
　　2、術后第14天，取材小鼠腓腸肌肌肉樣本，手術組動物分別取材左側(手術側)腓腸肌和右側腓腸肌，右側腓腸肌作為自身對照

6、組，假手術組動物取材左側(假手術側)腓腸肌，正常對照組取材左側腓腸肌。每個腓腸肌標本平均分為三份，分別提取總RNA、總蛋白和進行免疫熒光染色。
　　3、應用實時熒光定量RT-PCR檢測腓腸肌中syncytinmRNA的水平，以β-actinmRNA水平為內參。
　　4、應用western-blot檢測腓腸肌中syncytin蛋白的水平，以GAPDH蛋白水平為內參。
　　5、腓腸肌進行石蠟包埋、切片，應用熒光免疫組化的方

7、法檢測syncytin在骨骼肌中的表達部位。
　　實驗結果：1、術前與術后第1天，手術組、假手術組小鼠兩側足趾間距無顯著差異(均P>0.05)。術后5、9、13天，手術組小鼠兩側足趾間距比假手術組小鼠顯著縮短(均P<0.05)。
　　2、術后14天，手術組小鼠手術側腓腸肌syncytinmRNA水平比手術組自身對照組、假手術組、正常組腓腸肌syncytinmRNA水平顯著增高(均P<0.05)。
　　3、術后14天，手

8、術組小鼠手術側腓腸肌syncytin蛋白水平比手術組自身對照組、假手術組、正常組腓腸肌syncytin蛋白水平顯著增高(均P<0.05)。
　　4、腓腸肌石蠟切片免疫熒光染色可見syncytin位于骨骼肌細胞膜。
　　結論：坐骨神經橫斷損傷后，小鼠運動功能明顯受損。坐骨神經損傷后14天在失神經支配的腓腸肌中內源性逆轉錄病毒膜蛋白syncytinmRNA及蛋白水平顯著增高。免疫熒光組化染色顯示syncytin在骨骼肌細胞膜陽性