miR-497對ST段抬高型心肌梗死患者急診PCI術后無復流的影響及機制研究.pdf

1、背景：
　　無復流（no-reflow）概念早期臨床應用在急性心肌梗死溶栓治療的血流評價，目前是指在冠狀動脈病變行再通治療以后，排除病變部位急性閉塞、高度狹窄、血栓、嚴重夾層、心外膜血管痙攣等因素后冠脈前向血流急性減少，TIMI血流分級≤Ⅰ級者為無復流，TIMIⅡ級者為慢血流（slow-flow）。冠脈無復流目前機制仍然不明確，目前認為與多種因素導致的微血管功能障礙有關，它使惡性心律失常率、再次心肌梗死率及死亡率增加10倍左右，而

2、且心功能障礙多見，是急性心肌梗死（AMI）遠期心血管事件的獨立預測指標。早期診斷和防治冠脈無復流有重要的臨床價值，可大大改善AMI患者心功能及遠期預后。盡早使梗死相關血管（IRA）再通，給予冠脈血管重建，恢復心肌灌注，是AMI患者治療的關鍵所在。臨床上，ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者起病12小時內首選急診介入治療，經治療后雖然可使梗死相關血管再通，但仍有相當一部分病人因發(fā)生無復流或慢血流而引起冠脈微血管損傷和功能異常，最終導致預

3、后不良。因此，心肌微循環(huán)的充分再灌注是血管重建后改善預后的關鍵。而STEMI患者PCI術后的微循環(huán)灌注評估以及預后的相關危險因素目前仍然不明確，需要進一步探討研究。
　　MicroRNAs（miRNAs）在真核生物的基因調控中起著重要作用，廣泛參與了細胞增殖、分化、發(fā)育、凋亡等多種生理病理活動。新近研究發(fā)現：miRNAs在組織或血清中的異常表達與多種人類疾病密切相關，對其診斷及預后分析起著重要的作用。血液中miRNAs能夠在細胞之

4、外游離存在，并在循環(huán)血液中保持穩(wěn)定，它們有望成為血液中新興的分子標志物，對提高疾病診斷和預后判斷的能力起著巨大的促進作用。在疾病的發(fā)生過程中，與組織細胞中一樣，血液中miRNAs的表達譜也會產生特征性的變化，這些特定的 miRNAs表達譜可構成疾病的“指紋”以用于疾病的預測、診斷和預后判斷，從而成為一種新的無創(chuàng)傷性診斷標志物。目前，血清miRNAs作為心血管疾病生物標志物的研究取得了一定的成績。
　　研究發(fā)現腦缺血再灌注的小鼠腦組

5、織 miR-497表達水平明顯升高；缺氧復氧損傷的神經細胞 miR-497表達水平同樣增加，其機制可能與調節(jié)相關的細胞凋亡信號通路有關，提示了 miR-497可以調節(jié)細胞凋亡。大量研究表明缺血再灌注損傷是冠脈無復流發(fā)生的主要機制之一，目前miR-497對急性心肌梗死PCI術后無復流的影響并沒有相關的研究。在心肌缺血再灌注時 miR-497的表達水平是否同樣升高？急診PCI術后miR-497的表達水平是否會發(fā)生變化？它和無復流是否相關？它

6、是否可以通過調控線粒體凋亡途徑和線粒體的損傷促進心肌細胞的凋亡，從而參與缺血再灌注損傷及無復流，值得進一步研究。
　　本研究的意義在于通過明確血清miR-497表達水平與STEMI患者急診PCI術后無復流的關系及相關機制，為今后將miR-497作為早期診斷無復流、評估STEMI患者PCI術后的微循環(huán)灌注和預后指標提供理論依據；也有利于提高我們對PCI術后無復流現象的病理生理機制的認識；為今后將 miR-497作為冠脈無復流的治療靶

7、點提供理論依據。
　　研究目的：
　　本研究擬探討血清miR-497水平與STEMI患者急診PCI術后無復流的相關性以及血清miR-497水平與STEMI患者急診PCI術后心血管事件發(fā)生的關系，并在缺氧/復氧(A/R)損傷的心肌細胞模型通過采用激動劑和拮抗劑研究 miR-497對線粒體凋亡途徑和細胞凋亡的影響。
　　研究方法：
　?。?）為研究miR-497表達水平與STEMI患者急診PCI術后無復流的關系，收集

8、患者不同時刻的（術前、PCI術后6h、24h、36h和48h）血清樣本，提取miR-497，觀察miR-497表達水平。
　?。?）把STEMI患者分成無復流組和復流組，觀察miR-497表達水平與PCI術后無復流現象的相關性，隨訪患者主要不良心臟事件（MACE）發(fā)生率。
　?。?）為研究miR-497的基因調控功能，構建其激動劑agomir和拮抗劑antagomir轉染心肌細胞使其過表達或低表達miR-497，研究miR-

9、497表達變化對A/R誘導的心肌細胞損傷的影響。
　　（4）為研究miR-497調節(jié)心肌細胞凋亡的下游信號轉導通路，使用激動劑agomir和拮抗劑 antagomir轉染心肌細胞，而后對其進行 A/R處理，測定線粒體膜電位、Caspase-3活性，以及Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表達量。
　　結果：
　　（1）與對照組相比，STEMI組miR-497表達水平增加，且隨著時間的變化（術前、P

10、CI術后6h、24h、36h和48h），miR-497表達水平逐漸降低：miR-497（0.25±0.10 vs4.11±0.54 vs3.36±0.32 vs2.98±0.22 vs1.65±0.11 vs1.01±0.12，P=0.012），提示STEMI患者體內miR-497水平明顯升高，隨著心肌缺血缺氧的改善，miR-497水平逐漸降低。
　?。?）急診PCI術后出現無復流現象患者在不同時段miR-497相對表達量高于復流

11、患者：術前（5.36±0.25 vs3.88±0.45，P<0.001），術后6h（4.10±0.15 vs3.12±0.21，P=0.048），術后24h(3.88±0.16 vs2.46±0.25，P=0.004)，術后36h（1.90±0.12 vs1.24±0.18，P=0.022），術后48h（1.84±0.16 vs0.80±0.12，P<0.001）；多因素logistic回歸分析提示 miR-497高表達是無復流發(fā)生的危

12、險因子(OR=2.733)；隨訪患者主要不良心臟事件（MACE）發(fā)生率，高表達miR-497組MACE發(fā)生率明顯高于低表達miR-497組，有統計學差異（P＜0.05）；主要不良心臟事件的Cox風險比例回歸模型分析結果也表明miR-497高表達是MACE獨立預測性較強的因子(OR=1.872)。
　?。?）構建miR-497激動劑agomir和拮抗劑antagomir轉染心肌細胞可以過表達或低表達miR-497，過表達可使心肌細胞

13、 miR-497表達上調大于3.5倍，低表達可使心肌細胞 miR-497表達下調60％，經 TUNEL、Hoechst33258染色以及應用PI和AnnexinV染色流式細胞術分析，miR-497過表達可增加A/R誘導的心肌細胞凋亡，而miR-497低表達可減輕A/R誘導的心肌細胞凋亡。
　?。?）過表達miR-497可加重A/R誘導的線粒體膜電位降低，增加Caspase-3活性，從而使Bcl-2表達減少，Bax、cleaved