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文檔簡介
1、在本實驗中，來自釀酒酵母HS1185的胞外β-1，3-葡聚糖基因被插入TA克隆載體pMD-18中，并被轉入大腸桿菌JM109中。重組質粒命名為pMDT-18-GLU。通過Xho I和Nco I雙酶切質粒pMDT-18-GLU獲得的β-1，3-葡聚糖基因片段插入pET22b(+)的Xho I和Nco I酶切位點。此重組質粒命名為pET22b/GLU。質粒pET22b-GLU被轉入大腸桿菌BL21(DE3)，通過菌落PCR篩選出陽性克隆。
2、 提取出來已經插入β-1，3-葡聚糖基因的pET22b-GLU質粒和pET22b(+)通過PCR擴增和限制性內切酶驗證分析。PCR質粒pET22b-GLU擴增出1337 bp的條帶，與釀酒酵母中β-1，3-葡聚糖基因大小一致。在酶切驗證中，重組質粒pET22b/GLU被Xho I和Nco I雙酶切，得到了5431 bp和1337 bp的兩條帶，分別為pET22b(+)和β-1，3-葡聚糖基因。最后通過測序來進一步驗證正確的基因序列
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