凝血酶電化學適體傳感器的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩105頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、凝血酶是一種由凝血酶前體形成的絲氨酸蛋白質水解酶,具有催化纖維蛋白元變成纖維蛋白,促進血液凝固和調控凝血等作用,在揭示腫瘤的發(fā)生機制及作為早期診斷、療效及愈后判斷依據(jù)等方面有著非常重大的意義。由于血液中凝血酶的濃度達nmol·L-1,建立簡單、快速、高靈敏度檢測凝血酶的方法具有非常重要的意義。將SELEX技術篩選出的適體作為識別元件與電化學生物傳感器相結合構建電化學適體傳感器,集成了適體和電化學傳感器兩方面的優(yōu)勢,既具有電化學傳感器的高

2、靈敏度、快響應、簡單操作、低成本,又具有適體的高選擇性和特異性,在凝血酶檢測方面具有廣闊的應用前景。本文的研究目的是構建簡單、可靠、快速、高靈敏度的電化學適體傳感器用于凝血酶的檢測。圍繞本研究目的主要從電化學適體傳感器敏感界面的構建,多功能化復合納米材料的制備以及新型電化學信號放大策略等進行了探索和研究。本文分以下幾個部分組成:
   第一章緒論,簡要對適體的體外篩選方法、適體的特點、適體與凝血酶的相互作用進行了概述。詳細介紹了

3、電化學適體傳感器的基本原理和其分類,適體的固定化方法以及相關的電化學分析技術,重點評述了納米粒子、酶催化、雜交鏈式反應和目標循環(huán)信號放大技術在電化學適體傳感器中的應用。最后引出本論文的選題背景、研究意義、研究目的和研究內容。
   第二章,由于適體本身為非電活性,或者適體中A、G和C堿基的電氧化還原信號低,且電化學調制不利于適體親合性質的保持,大部分電化學適體傳感器都需要功能性標記物以得到可定量檢測的電化學信息。然而標記物的標記

4、過程復雜、耗時、成本較高,且標記過程可能會影響其生物活性?;趯訉幼越M裝技術在金電極表面組裝了{nano-Au/Thi}n多層膜,并以此為氧化還原探針和凝血酶適體固載基質構建了一種signal-off型免標記電化學適體傳感器用于凝血酶的檢測。該方法無需對適體進行電活性物質標記,一定程度上大大增加了電活性物質在電極表面的固載量和減少了電活性物質與電極表面的距離,具有操作簡單、響應快、特異性強等特點。同時,該適體傳感器的構建方法適用于其他各

5、種適體的固載,在蛋白質檢測和疾病診斷等領域都有很廣的應用前景。
   第三章,G-四鏈體-卟啉鐵(hemin/G-quadruplex)作為酶催化標記能有效放大電化學響應信號。與普通的蛋白酶相比較它更易于標記、成本低,穩(wěn)定性好和抗水解性強。利用凝血酶適體富含G堿基能與卟啉鐵hemin結合形成具有類似辣根過氧化物酶電催化增強性質的催化結構hemin/G-quadruplex,構建了電催化放大信號的signal-off型電化學適體傳

6、感器用于凝血酶的檢測。并首次提出使用HRP封閉電化學適體傳感器表面的非特異性吸附位點,且同時催化放大響應電流信號,進而提高電化學適體傳感器的靈敏度的新方法。該傳感器實現(xiàn)了對凝血酶高特異性和高靈敏度的識別,免去了電活性物質和酶的標記。經(jīng)實驗研究表明,該傳感器構建方法簡單,切實可行,大大提高了電化學適體傳感器的靈敏度。
   第四章,金屬納米催化信號放大與酶相比,其熱穩(wěn)定性有很大的改善。以電惰性物質十八酸OCA和具有雙功能的Au-P

7、tNPs電催化雙重放大響應信號制備了目標物引起的signal-on型電化學適體傳感器用于凝血酶的檢測。在測試底液中存在H2O2情況下,Au-PtNPs對亞甲藍MB的氧化還原反應起到明顯的增強作用。進行定量分析時,傳感器表面阻礙電子傳輸?shù)氖怂酧CA修飾的凝血酶適體捕獲目標分子后離開電極表面,電極表面空間位阻減少,同時Au-PtNPs的催化活性增加,使所得的響應信號進一步增加,從而有效地提高了電極靈敏度。該適體傳感器構建方法簡單、響應快、

8、靈敏度高、穩(wěn)定性好,將其用于臨床樣品檢測,得到滿意結果。
   第五章,通過π-π堆垛制各了具有一對很好氧化還原峰和類似辣根過氧化物酶催化作用的苝四甲酸/卟啉鐵復合納米材料(PTC/hemin)。并結合葡萄糖氧化酶(GOx)作為封閉劑構建了一種基于PTCA/hemin納米復合材料為氧化還原探針及催化劑的仿雙酶放大信號signal-on型電化學適體傳感器用于凝血酶的檢測。PTCA/hemin復合納米材料良好的成膜性避免了傳統(tǒng)固載電

9、活性物質和酶的復雜過程,同時也減少了固載電活性物質過程中電惰性物質的加入,操作簡單、靈敏度高。GOx作為封閉劑封閉傳感器表面的非特異性吸附位點,且同時構建了仿雙酶催化放大響應電流信號,進而進一步提高了電化學適體傳感器的靈敏度。
   第六章,雙酶催化放大信號優(yōu)于單酶催化體系,通過將hemin/G-quadruplex同時作為辣根過氧化物模擬酶和NADH氧化酶構建了仿雙酶夾心式電化學適體傳感器用于凝血酶的檢測。與傳統(tǒng)的酶標適體傳感

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論