T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)篩選與p38 MAPK及PRAK相結合蛋白.pdf_第1頁
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1、ABSTRACT IN CHINESEp38 MAPK是一種應激激活的絲/蘇氨酸蛋白激酶,屬于MAPK超家族;目前已發(fā)現(xiàn)p38 MAPK家族成員有p38(α)、p38 β、p38 γ、p38 δ,分子量約38~40kD.各個亞型之間的不同功能部分與它們在不同組織的表達,激活方式以及底物特異性相關,不同的p38能被細胞應激(紫外線輻射、滲透性休克、熱休克、脂多糖、蛋白合成抑制劑)、某些細胞因子IL-1、TNF-α等激活.我們亞克隆了兩個H

2、PC2的真核表達載體:pEGFP-C2/HPC2與pcDNA3-flag/HPC2,并將pEGFP-C2/HPC2轉染人胚腎293細胞(HEK293)中,發(fā)現(xiàn)增強型綠色熒光(EGFP)主要存在于核內,并且在核的某些區(qū)域有較強EGFP的不連續(xù)聚集,呈顆粒狀分布;隨后我們探討了HPC2對應激刺激的反應,發(fā)現(xiàn)細胞內過表達的EGFP/HPC2僅對山梨醇(sorbito1)引起的高滲有反應,由刺激前的聚集于核內發(fā)展為刺激后的彌散分布于整個細胞,而

3、對LPS、NaAsO2、H2O2刺激并未出現(xiàn)這種反應;我們將pcDNA3-flag/HPC2轉染HEK293后,給予sorbitol刺激,利用核質分離和western blot技術得到進一步證實;雖然,我們在篩選過程中用p38和PRAK同時得到HPC2,但研究發(fā)現(xiàn)p38特異性抑制劑SB203580不能阻止sorbitol引起HPC2的出核效應.綜上所述,我們利用T7噬菌體展示篩選系統(tǒng),以p38 MAPK和PRAK為靶蛋白,篩選了人肝和人

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