攜帶hBMp-2的tet-on慢病毒載體轉染人臍帶間充質干細胞及Hbmp-2的體外表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：研究攜帶hBMP-2的tet-on慢病毒載體對人臍帶間充質干細胞(humanumbilical cord mesenchymal stem cells，HUCMSCs)的轉染及轉染后hBMP-2在強力霉素誘導下的表達情況。
　　 方法：按照文獻方法培養(yǎng)人臍帶間充質干細胞，消化傳代，轉染前一天，選取3-4代生長狀態(tài)良好的HUCMSCs按照融合度40％接種到六孔板中，第二天進行pLV/EXPN2-Puro-EF1A-rtTA、

2、pLV/EXPN2-Neo-TRE-hBMP2共轉染，轉染后8h更換培養(yǎng)液。待培養(yǎng)24h之后用嘌呤霉素和G418進行穩(wěn)定篩選。提取DNA進行PCR檢測，確定基因是否已成功轉入。選取穩(wěn)定篩選后的臍帶間充質干細胞，分別在不同強力霉素誘導濃度相同誘導時間和不同誘導時間相同強力霉素誘導濃度情況下用ELISA測定hBMP-2的表達情況。對轉染前后的HUMSCs進行成骨誘導，用茜素紅染色法觀察礦化物結節(jié)形成情況。
　　 結果：攜帶hBMP-

3、2的tet-on慢病毒載體可成功轉染人臍帶間充質干細胞，且HUCMSCs可以通過強力霉素的誘導可控性表達hBMP-2。在相同誘導時間情況下，強力霉素10μ g/ml時誘導表達最強，而在相同誘導濃度下，hBMP-2的表達在誘導48h后達峰值。HUCMSCs成骨誘導培養(yǎng)2周后，茜素紅染色示細胞漿中有大量紅色的鈣化基質沉積。
　　 結論：攜帶hBMP-2的tet-on慢病毒載體成功轉染人臍帶間充質干細胞，并初步研究了hBMP-2在體外

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