植酸酶分泌型酵母工程菌株的構建及活性分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究的目的是克隆植酸酶基因并通過轉基因技術構建有效分泌植酸酶的酵母工程菌株,為食品添加劑或菌肥的研究奠定基礎.首先根據已發(fā)表的無花果曲霉(A.ficuum)植酸酶cDNA序列設計出兩端的引物,以無花果曲霉總RNA為模板通過反轉錄PCR擴增出含其自身信號肽的植酸酶基因(phyA)序列.為了獲得合適的酶切位點,將獲得的大約1.4kb大小的PCR基因片段克隆進T載體,構建出中間載體pMP2并轉入大腸桿菌中擴增.然后用限制性內切酶KpnI和S

2、phI酶切pMP2,回收1.4kb大小的phyA片段,分別與酵母表達載體pGL(含α因子)和pYES2連接并轉化大腸桿菌,篩選出含phyA基因的重組質粒pGPA1和pYPA1.用醋酸鋰法將pGPA1和pYPA1轉化進Ura缺陷型的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae INVSel),篩選獲得含植酸酶基因的酵母菌株.用磷鉬藍顯色(AMES)法對酵母培養(yǎng)液進行酶活測定,在pGPA1酵母培養(yǎng)液上清中沒有測出植酸酶活性,而

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