牛泡沫病毒反式激活因子(Borf-1)結構及功能的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該文以該實驗室分離并鑒定的牛泡沫病毒中國毒株(BFV3026)為材料,經PCR構建Borf-1全長及系列缺失原核表達質粒,并利用大腸桿菌pET系統(tǒng)表達并純化Borf-1及其系列缺失蛋白.通過凝膠阻滯試驗和蛋白質轉染瞬時表達,探討B(tài)orf-1對兩類啟動子的結合、激活功能.同時,為探索BFV LTR、IP及Borf-1在原核細胞中的功能,該文構建含BFV IP、LTR及其系列缺失與熒光素酶基因luc的重組質粒,轉化大腸桿菌E.coliJM1

2、09,結果表明IP不能在原核細胞中行使啟動子功能,而BFV LTR可在原核細胞中有效啟動luc基因的表達,且啟動區(qū)域位于-90至-125位之間.序列分析證實該區(qū)域內存在與原核啟動子保守區(qū)同源性很強的序列.質粒共轉化試驗表明:BFV的主要調節(jié)蛋白Borf-1在E.coli中間樣可以激活其自身的LTR,蛋白N端36aa與激活作用無關,其在LTR上的應答區(qū)仍位于-310/-140之間,推測BFV的Borf-1對其LTR的激活機制普遍存在于從真

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