修飾多發(fā)性硬化病程藥物機制探索——醋酸格拉默.pdf

1、研究目的：
　　醋酸格拉默（Glatiramer acetate,GA）是一種具有免疫調節(jié)作用的藥物，它已經被批準用于多發(fā)性硬化癥（中樞神經系統(tǒng)脫髓鞘疾?。┑囊痪€治療。但是，醋酸格拉默在治療多發(fā)性硬化癥中的免疫調節(jié)機制仍不完全清楚。雖然改善對髓鞘抗原,如中樞髓鞘堿性蛋白（Myelin basic protein,MBP）的免疫反應可能是它的免疫調節(jié)機制，但是醋酸格拉默的免疫調節(jié)機制是否是抗原非特異性的仍不清楚。在本實驗中，我們應用

2、與中樞抗原MBP不同的周圍神經抗原P0，誘導人類吉蘭巴雷綜合征的動物模型-實驗性自身免疫性神經炎（Experimental autoimmune neuritis,EAN）作為工具，探索醋酸格拉默的免疫調節(jié)作用是否具有抗原非特異性。
　　研究內容和方法：
　　通過周圍神經髓鞘抗原P0（Protein0）免疫lewis大鼠的方法誘導實驗性自身免疫性神經炎，在lewis鼠造模前和發(fā)病后分別皮下注射醋酸格拉默，觀察動物的臨床評分和

3、體重變化。同時在發(fā)病高峰期即造模后第16天，通過肌電圖評估坐骨神經髓鞘和軸索損傷；通過HE染色和Luxol Fast Blue病理染色觀察髓鞘變化；通過酶聯免疫法檢測多種炎性細胞因子變化。體外實驗通過H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法檢測醋酸格拉默對不同抗原P0、MBP、LPS（Lipopolysaccharide）刺激的T細胞增殖。
　　實驗結果：
　　免疫前或者免疫后10天皮下注射醋酸格拉默均減輕了該疾病的臨床評分，

4、同時醋酸格拉默治療組大鼠的體重明顯較對照組增加，具有顯著的統(tǒng)計學差異。肌電圖研究表明，治療組坐骨神經遠端運動潛伏期明顯降低，運動傳導速度明顯增加，波幅明顯增高，表明醋酸格拉默減輕了髓鞘和軸索損傷。神經病理HE和Luxol Fast Blue染色證實了免疫前注射醋酸格拉默減輕了P0誘導的EAN坐骨神經脫髓鞘。ELISA（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）結果表明在治療組，炎性因子如Interferon-g

5、ama（INF-γ），IL-6，IL-12，IL-17明顯降低，IL-10明顯升高，均具有統(tǒng)計學意義，進一步驗證了醋酸格拉默對周圍神經脫髓鞘疾病具有抑制炎癥的作用。我們的體外實驗通過 H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法進一步證實了醋酸格拉默對周圍神經抗原P0、中樞神經抗原MBP、非特異性抗原刺激的T細胞增殖均有抑制作用，治療組和對照組有顯著的統(tǒng)計學差異。
　　結論：
　　醋酸格拉默減輕了實驗性自身免疫性神經炎造成的神經功