HBV相關慢加急性肝衰竭患者維生素D及其愛華變化的意義.pdf

1、目的:乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）相關慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)是在慢性乙型肝炎基礎上發(fā)生的嚴重肝功能損害，出現(xiàn)以黃疸、肝性腦病和腹水等為主要表現(xiàn)的臨床綜合征，其發(fā)病急，病情兇險，病死率高且治療方法有限。目前關于肝衰竭的發(fā)病機制尚不十分明確。大多數(shù)學者認為肝衰竭主要是由免疫損傷、缺血缺氧、內毒素血癥三重致死性打擊的結果。肝衰竭時，肝臟功能發(fā)生嚴重

2、障礙，肝臟本身合成、解毒、排泄和生物轉化等發(fā)生嚴重障礙。維生素D是固醇衍生物，活性維生素D主要在肝臟合成。游離的活性維生素D進入細胞后能迅速與維生素D受體(Vitamin D Receptor，VDR)結合，發(fā)揮其生物活性。維生素D主要參與鈣磷代謝，近年研究發(fā)現(xiàn)維生素D影響細胞的增殖與分化，具有免疫調節(jié)、抗炎、抗纖維化等作用，因此發(fā)揮抑制肝臟腫瘤細胞增殖、抗肝硬化等作用。但目前維生素D與HBV相關肝功能衰竭之間的關系還未闡明。本研究通過

3、檢測HBV相關ACLF、慢性乙型病毒性肝炎（chronic hepatitis B，CHB）血清維生素D水平，同時比較兩組患者肝組織中VDR的表達，初步探討維生素D在HBV相關ACLF中的作用。
　　方法:收集2013年3月至2014年11月于河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院住院患者，共70例，其中CHB患者29例(CHB組)、HBV相關ACLF患者21例(ACLF組)及選取同期河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院健康體檢者20例（健康對照組）。并收集行肝移

4、植的ACLF患者13例、肝穿刺活檢的CHB患者肝組織16例及健康供體肝組織4例。 CHB和HBV相關ACLF的診斷分別符合中華醫(yī)學會感染病學分會及肝病學分會聯(lián)合制定的2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》和2012年版《肝衰竭診療指南》中的診斷標準。分別檢測個樣本生化學指標、凝血功能及HBV DNA載量，酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清維生素D的水平，使用熒光定量PCR檢測各樣本肝組織中的VDR mRNA，應用免疫組織化學的染色方法檢測肝組織內VD

5、R蛋白的表達部位，western blot檢測VDR蛋白的表達。比較血清VDR水平在各組之間的差異。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差((x)±s)表示。數(shù)據(jù)分析前進行正態(tài)性及方差齊性檢驗。滿足正態(tài)且方差齊時，采用單因素方差分析，組間比較采用Student-Newman-Keuls法。非正態(tài)或方差不齊時，采用Kruskal-WallisH秩和檢驗，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。相關性分析采

6、用Pearson直線相關分析法。P＜0.01為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、ACLF組、CHB組及健康對照組人口學及實驗室檢查特點
　　各組患者的性別和年齡構成比均衡可比。ACLF組患者血清丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶(aspartateaminotransferase，AST)、總膽紅素(total bilirubin，TBIL)、直接膽紅

7、素(direct bilirubin，DBIL)水平明顯高于CHB組及健康對照組（P均＜0.01）ACLF組患者血清白蛋白（albumin，Alb）、凝血酶原活動度（prothrombin activity，PTA）則明顯低于正常對照組，ACLF組和CHB組HBV DNA載量無明顯差異(P＞0.05)。
　　2、ACLF組、CHB組患者血清中25-(OH) VD3水平
　　21例ACLF患者、29例CHB患者及20例健康對照

8、者接受血清25-(OH) VD3水平檢測。ELISA檢測示:ACLF組血清VD3水平(42.27±18.43ng/ml)、CHB組（47.63±16.18ng/ml）均低于正常對照組(94.43±28.17ng/ml)，且ACLF組明顯低于CHB組，差異均具有統(tǒng)計25-(OH)VD3學意義(P＜0.01)。
　　3、ACLF組、CHB組患者肝組織中VDR蛋白表達
　　13例ACLF患者、16例CHB患者及4例健康對照者接受肝

9、臟VDR蛋白檢測。免疫組化檢測示:VDR廣泛表達于肝細胞及肝臟炎癥細胞。WB檢測示:ACLF組VDR蛋白表達（1.336±0.115）明顯高于CHB組（1.071±0.079）及正常對照組（0.830±0.112），且CHB組明顯高于正常對照組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。RT-PCR檢測示:ACLF組VDR mRNA表達（2.65±0.32）明顯高于CHB組(1.20±0.39)及健康對照組（0.93±0.07），差異均具有

10、統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。同時，CHB組與健康對照組的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.01）。
　　4、ACLF組、CHB組患者血清25-(OH) VD3水平與HBV DNA的相關性
　　ACLF組患者血清VD3不足（＜29ng/m1）的發(fā)生率明顯高于CHB組（38.09％vs.6.8％，P＜0.01）。ACLF組患者血清VD水平與HBV DNA載量（r=-0.21，P=0.32）無相關性，CHB組患者血清VD水平與HBV DN