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文檔簡介
1、隨著全基因組測序的完成,人們發(fā)現(xiàn)了芽殖酵母Saccharomycescerevisiae基因組包含了近6千個編碼蛋白質的基因和未知功能的開放閱讀框(OpenReadingFrame,ORF)。在本項研究工作中,我們對芽殖酵母的新基因IRC4的功能進行了深入和系統(tǒng)的研究。
我們的研究結果顯示,將這個基因敲除可以導致細胞自發(fā)形成Rad52foci的水平上調,而且它和DNA損傷檢查機制重要感應因子Rad24具有相互作用,表明Ir
2、c4可能在DNA損傷響應機制中起作用。另外,我們發(fā)現(xiàn),敲除Irc4的碳端(氨基酸139-189)所導致的細胞自發(fā)形成Rad52foci的水平與敲除全長相似;而在Irc4單敲的品系中轉化入Irc4的碳端和全長,均可以將細胞自發(fā)形成的Rad52foci水平降低至背景水平。這些結果表明,Irc4的碳端是影響細胞自發(fā)形成Rad52foci的水平的主要區(qū)域。
我們的研究還發(fā)現(xiàn),Irc4蛋白可以和自吞噬重要蛋白激酶Atg1在體內(nèi)和體外
3、都能發(fā)生相互作用,但Irc4和Atg1的雙敲除品系的細胞自發(fā)產(chǎn)生Rad52foci的水平與Irc4單敲的品系很接近,意味著Irc4和Atg1通過同一個調控通路影響Rad52foci的水平。對Irc4的進一步研究表明,Irc4的敲除,可以在一定程度上促進酵母細胞在饑餓和Rapamycin處理條件下自噬小泡裝配位點的形成,同時還會部分地影響自吞噬進程。因此我們猜測,Irc4可能通過與Atg1這一自噬小泡裝配位點重要骨架蛋白的直接相互作用來影
4、響自噬小泡裝配位點的形成,而它自身可能也參與了自吞噬調控機制的某些功能。
綜上所述,我們認為,Irc4既作用于DNA損傷響應機制,也作用于自吞噬調控機制;它是酵母細胞內(nèi)這兩套重要生理調控機制之間的聯(lián)系分子。
另外,Elg1是重要的DNA復制和基因組穩(wěn)定性蛋白。我們的研究顯示,Irc4和Elg1的雙敲除品系的細胞自發(fā)產(chǎn)生Rad52foci的水平要遠高于Irc4或者是Elg1單敲的品系,意味著它和Irc4是通過相
5、互獨立的兩條控制通路來影響細胞自發(fā)產(chǎn)生Rad52foci的水平。我們還采用酵母基因芯片研究了Elg1敲除細胞的細胞周期不同時相的基因表達譜。結果表明,Elg1敲除導致了一系列DNA損傷響應相關的基因表達的變化,而且Elg1敲除的細胞比野生型的對DNA損傷抑制劑MMS更為敏感。因此,Elg1是重要的DNA損傷響應機制的組成成分。在另一方面,Elg1的缺失導致了細胞周期行進的異常;這一異常有可能是Elg1影響崗崎片斷的成熟相關;并且該缺失還
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