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文檔簡介
1、目的:心肺復蘇后腦損傷是導致心跳驟?;颊邚吞K后死亡和致殘的重要原因。近年來,腦腸肽ghrelin在多種疾病中的神經保護作用被廣泛證實。本研究旨在觀察ghrelin對大鼠心肺復蘇后腦損傷的作用并初步探討其可能機制。
方法:第一部分:健康成年SD大鼠分三組:①sham組:僅行假手術對照;②vehicle組:經皮電刺激心外膜法誘導心跳驟停并持續(xù)6 min,心肺復蘇成功后給予0.9%生理鹽水靜脈注射;③ghrelin組:經皮電刺激心外
2、膜法誘導心跳驟停并持續(xù)6 min,心肺復蘇成功后給予ghrelin(80μg/kg)靜脈注射。假手術或自主循環(huán)恢復(ROSC)后24、48、72 h進行膠帶移除實驗,評價并比較三組大鼠神經功能損傷狀況。ROSC72 h后,處死大鼠取全腦,切片并進行HE染色,觀察大鼠腦組織及細胞形態(tài)損傷情況并計數海馬CA1區(qū)正常細胞個數。TUNEL法染色觀察大鼠腦神經元凋亡情況,并計數海馬CA1區(qū)陽性細胞個數。第二部分:健康成年SD大鼠分三組:①sham
3、組;②vehicle組;③ghrelin組。假手術或ROSC后6 h處死大鼠。(1)分別取腦組織進行western blot和免疫組化實驗,檢測并比較三組大鼠海馬凋亡相關因子caspase-3、bax和bcl-2蛋白表達變化。(2)取腦組織進行ELISA實驗,檢測并比較三組大鼠海馬組織炎癥因子TNF-α和IL-1β水平。(3)分別取腦組織,生化法比較海馬組織MDA含量和SOD活性,然后進行western blot和免疫組化實驗,檢測并比
4、較三組大鼠線粒體解耦連蛋白-2(UCP-2)表達變化。(4)分別取腦皮質組織提取純化線粒體,行功能學實驗評價并比較三組大鼠腦線粒體ATP合成效率、活性氧(ROS)產率;生化法比較腦皮質MDA含量、SOD活性及ATP含量;western blot法檢測皮質線粒體UCP-2表達水平;JC-1法觀察線粒體膜電位變化;透射電鏡法觀察并比較三組大鼠神經元線粒體形態(tài)變化。
結果:(1)ghrelin提高大鼠復蘇后48 h、72 h神經功能
5、評分,減輕神經元形態(tài)損傷,減少海馬區(qū)細胞凋亡。(2)ghrelin降低復蘇后6 h海馬組織caspase-3蛋白表達,提高bcl-2/bax蛋白表達比值。(3)ghrelin降低復蘇后6 h海馬組織TNF-α和IL-1β水平。(4) ghrelin降低復蘇后6 h海馬組織MDA含量,提高其SOD活性。(5)ghrelin上調海馬組織UCP-2蛋白表達水平。(6)ghrelin提高復蘇后6 h腦線粒體ATP合成效率,降低其ROS產率。(7
6、)ghrelin降低復蘇后6 h腦皮質組織MDA含量,提高SOD活性及ATP含量。(8)ghrelin上調腦皮質組織UCP-2蛋白表達水平。(9)ghrelin保護皮質線粒體膜電位。(10)ghrelin改善復蘇后腦線粒體形態(tài)損傷。
結論:ghrelin對心肺復蘇后腦損傷具有保護作用,其機制可能與減輕復蘇后凋亡、炎癥及氧化應激反應有關。ghrelin能夠改善復蘇后腦線粒體功能和結構損傷,提高腦組織ATP含量并上調UCP-2表達
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