雷公藤紅素防治人工關節(jié)磨損顆粒誘導骨溶解的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  通過體內外實驗觀察不同劑量和細胞培養(yǎng)濃度雷公藤紅素對磨損顆粒誘導的小鼠顱蓋骨骨溶解及破骨細胞分化的影響,為將來雷公藤紅素應用于防治人工關節(jié)磨損顆粒誘導的骨溶解提供理論依據。
  方法:
  體外實驗中,先通過CCK-8法確定雷公藤紅素對小鼠BMMs來源的單核-巨噬細胞的安全濃度范圍;然后,在無毒濃度范圍內,觀察給予不同濃度雷公藤紅素刺激后,對M-CSF和RANKL誘導小鼠BMMs來源的單核-巨噬細胞分化為破

2、骨細胞的影響。體內實驗中,將20只6周齡雄性C57BL/6J小鼠隨機分為4組,空白對照組(Sham組)、單純磨損顆粒組(Vehicle組)、磨損顆粒+低劑量雷公藤紅素組(Low組1 mg/kg)和磨損顆粒+高劑量雷公藤紅素組(High組3 mg/kg)。利用磨損顆粒誘導小鼠顱骨骨溶解模型,分別按3mg/kg(高劑量組)、1mg/kg(低劑量組)雷公藤紅素的劑量腹腔注射,隔日給藥,空白對照組和單純顆粒組小鼠注射同等體積的生理鹽水。建模2周

3、后采用摘除眼球法取血后處死小鼠,完整取下小鼠顱蓋骨標本。小鼠血清通過ELISA試劑盒檢測與骨吸收代謝特征性指標TRAP5b和CTX-Ⅰ的表達水平;小鼠顱蓋骨先進行Micro-CT掃描,統計分析各項骨參數,再通過制作病理切片HE染色觀察顱骨組織形態(tài)并進行定量分析。
  結果:
  不同劑量、濃度雷公藤紅素處理組小鼠存活及細胞增殖均未受到影響。體外實驗發(fā)現,在安全濃度范圍內,雷公藤紅素可以顯著抑制小鼠BMMs來源的單核-巨噬細胞

4、向破骨細胞分化。體內實驗中,磨損顆粒能夠有效誘導小鼠顱蓋骨溶解,在給予雷公藤紅素治療后,顱蓋骨骨溶解被明顯抑制了,而且這種抑制效應表現出劑量依賴性。小鼠顱蓋骨經Micro-CT掃描后,統計分析感興趣區(qū)域(ROI)的各項骨參數,骨礦物質密度(BMD)、骨體積分數(BVF)和骨孔隙率的結果進一步證實了上述結論。小鼠顱骨組織切片HE染色發(fā)現,在雷公藤紅素治療組內,炎癥細胞浸潤、骨質破壞明顯減少。小鼠血清TRAP5b和CTX-Ⅰ檢測發(fā)現,藥物組

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