p16基因的過(guò)表達(dá)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、食管癌是我國(guó)發(fā)病率和死亡率較高的消化道腫瘤，其中較為常見(jiàn)的組織學(xué)類型為食管鱗癌，大約占到食管癌的90％以上。食管癌的發(fā)生和發(fā)展涉及多個(gè)基因的調(diào)控和改變，研究這些基因在食管癌中的功能有助于闡明食管癌的發(fā)病機(jī)理，為基因靶向治療提供新的思路和方法。
　　p16基因位于人類第9號(hào)染色體上，是一個(gè)重要的細(xì)胞周期調(diào)控因子。該基因的表達(dá)產(chǎn)物能夠與細(xì)胞周期蛋白D（Cyclin D）競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合細(xì)胞周期蛋白依賴激酶（Cyclin Dependent

2、 Kinase，CDK）4或6，抑制CDK4的活性，促使視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白R(shí)b去磷酸化，阻滯細(xì)胞周期的正常運(yùn)行，調(diào)控細(xì)胞周期G1期到S期的轉(zhuǎn)變。在許多腫瘤細(xì)胞中，p16基因存在高頻率的突變或缺失，表明該基因可能參與了多種腫瘤的發(fā)生過(guò)程，因此對(duì)該基因的深入研究能夠進(jìn)一步弄清腫瘤的起因，為腫瘤的預(yù)防、診斷和治療提供理論依據(jù)。
　　抑癌基因的失活和/或原癌基因的激活是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的最基本的分子事件，因此可以嘗試通過(guò)增強(qiáng)抑癌基因的表達(dá)來(lái)提

3、高人體自身的腫瘤抑制能力。p16基因作為一個(gè)重要的抑癌基因，它能夠通過(guò)直接阻滯細(xì)胞周期而抑制細(xì)胞增殖，在基因治療腫瘤中潛力巨大。
　　目的：
　　對(duì)人類p16基因在食管鱗癌細(xì)胞EC9706中的功能進(jìn)行探討，研究該基因?qū)C9706細(xì)胞增殖和凋亡的影響，分析其作為治療食管鱗癌靶向基因的可能性。
　　方法：
　　PCR擴(kuò)增人類p16基因，構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-p16，通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染將重組載體導(dǎo)入EC9

4、706細(xì)胞。抗生素篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株，并利用半定量PCR和Western Blot對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行鑒定。通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)p16基因高表達(dá)后對(duì)EC9706細(xì)胞增殖的影響，并利用Western Blot檢測(cè)凋亡起始蛋白Caspase9的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　與對(duì)照組相比，抗生素篩選得到的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中 p16基因和蛋白的表達(dá)量顯著增高，表明pcDNA3.1(+)-p16在轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞中穩(wěn)定持續(xù)的表達(dá)；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株增