兔骨髓間充質干細胞的培養(yǎng)及其載體的實驗研究.pdf

1、目的：于體外對新西蘭白兔骨髓間充質干細胞進行培養(yǎng)，分別采用密度梯度離心法和全骨髓貼壁培養(yǎng)法，并對兩種不同方法進行比較。應用培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞和羊膜構建結膜缺損的生物學修復材料。
　　方法：
　　1.正常的3月齡的新西蘭白兔，在無菌條件下，行骨髓穿刺獲得新西蘭白兔骨髓，分別采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法和密度梯度離心法對骨髓間充質干細胞進行分離、純化、培養(yǎng)，并進行傳代觀察。
　　2.分別將第3代骨髓間充質干細胞接種于預置蓋玻片

2、的六孔培養(yǎng)板中，細胞90％以上融合時，對細胞爬片進行免疫組化染色，并對兩種方法培養(yǎng)細胞的免疫組織化學結果進行對比。
　　3.將生長狀態(tài)良好的第3代骨髓間充質干細胞接種到羊膜基底面，待細胞融合，取材后于掃描電鏡下觀察細胞與羊膜的貼合狀況，于透射電鏡下觀察細胞情況。
　　結果：
　　1.兩種方法培養(yǎng)的間充質干細胞形態(tài)相似。原代培養(yǎng)的新西蘭白兔骨髓間充質干細胞呈簇狀、貼壁呈集落生長，細胞形態(tài)為梭形、多角形，傳代后細胞形態(tài)較為

3、均一，分布均勻。細胞增長活躍、傳代周期短。
　　2.免疫組織化學染色CD34（-）、CD44（+）。
　　3.全骨髓培養(yǎng)法較密度梯度離心法CD44的平均光密度值低，CD34的平均光密度值高。
　　4.電鏡下觀察到細胞可以生長于羊膜基底面，與羊膜良好貼合。
　　結論：
　　1.利用全骨髓貼壁培養(yǎng)法和密度梯度離心法均可以得到骨髓間充質干細胞，并可以傳代，細胞生長狀態(tài)良好。
　　2.免疫組織化學結果支持所獲