四種中藥復方制劑對氯吡格雷活性代謝產物在大鼠體內藥動學的影響.pdf

1、目的：建立抗血小板藥物氯吡格雷及其活性代謝產物的LC-MS/MS同時測定方法，通過比較合用四種中藥復方制劑（溶栓膠囊、血脂康膠囊、心元膠囊和松齡血脈康膠囊）前后大鼠體內氯吡格雷活性代謝產物（以其衍生物表示）藥動學參數的變化，探討四種中藥復方制劑對氯吡格雷活性代謝產物的藥動學是否有影響。
　　方法：
　　色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱（150mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈：1mmol/L乙酸銨溶液：甲

2、酸（80:20:0.01，V/V/V），流速為1.0mL/min，柱溫為40℃，進樣量為10μL，內標為噻氯匹定。
　　質譜條件：離子化方式：電噴霧離子化源（ESI）；檢測方式：正離子模式；掃描方式：多反應監(jiān)測（MRM）；離子源噴射電壓：5500V；離子源溫度：550℃；氣簾氣（CUR）壓力：25psi；霧化氣NEB（GS1，N2）壓力：55psi；輔助氣AUX（GS2，N2）壓力：50psi；碰撞氣（CAD）壓力：4psi；氯吡

3、格雷的解離電壓（DP）和碰撞能（CE）值分別為68V和21eV，活性代謝產物衍生物（CAMD）的DP和CE值分別為114V和26eV，噻氯匹定的DP和CE值分別為60V和23eV；用于定量分析的離子對分別為m/z322.2→212.0（氯吡格雷），504.4→354.1（CAMD），264.2→154.1（噻氯匹定）。
　　動物實驗：健康雄性SD大鼠40只，隨機分為對照組和4個實驗組。實驗組大鼠分別灌胃給予溶栓膠囊（75mg/kg

4、，3/日）、血脂康膠囊（60mg/kg，2/日）、心元膠囊（120mg/kg，3/日）、松齡血脈康膠囊（150mg/kg，3/日），連續(xù)給藥7天；對照組大鼠灌胃給予等體積蒸餾水，連續(xù)7天。五組大鼠均于第8天分別灌胃給予溶栓膠囊（75mg/kg）、血脂康膠囊（60mg/kg）、心元膠囊（120mg/kg）、松齡血脈康膠囊（150mg/kg）和等體積蒸餾水后灌胃給予氯吡格雷（7.5mg/kg），并于給藥前和給藥后5、10、20、30、45m

5、in、1、1.5、2、4、6、8、10h眼內眥取血0.5mL于含有20μL125mM2-溴-3’-甲氧基苯乙酮（MPB）的肝素鈉抗凝離心管中，渦旋混合30s，6500×g離心5min后取血漿，-40℃冷凍保存待測。
　　血漿處理方法：取血漿樣品200μL，加入600μL含10.5ng/mL內標的乙腈溶液，渦旋混合1min，6500×g離心5min，取上清液10μL進樣測定。
　　藥動學參數處理：采用DAS2.1.1軟件對每只

6、大鼠的系列血藥濃度進行統計矩自動擬合，得到藥動學參數；采用SPSS17.0軟件對實驗組與對照組的主要藥動學參數進行統計學分析。若比較的兩組參數均服從正態(tài)分布，則選用兩個獨立樣本的t檢驗進行分析；若其中一組不服從正態(tài)分布，則選用非參數檢驗進行分析。P值小于0.05則認為兩組間差異有統計學意義。
　　結果：氯吡格雷的保留時間為5.10min，CAMD的保留時間為3.21min，噻氯匹定的保留時間為5.68min，血漿內源性雜質對其濃度

7、的測定無干擾；標準曲線分別為：氯吡格雷：Y=0.02075X+0.00588（r=0.9992）（0.53～52.50ng/mL），CAMD：Y=0.00800X-0.0005（r=0.9990）（2.00～200.00ng/mL）；氯吡格雷低（1.64ng/mL）、中（6.56ng/mL）、高（42.00ng/mL）三個濃度的相對回收率分別為99.89％，100.29%，98.97%，絕對回收率分別為85.02%，85.47%，86.

8、93%，CAMD低（6.25ng/mL）、中（25.00ng/mL）、高（160.00ng/mL）三個濃度的相對回收率分別為98.96%，97.98%，99.63%，絕對回收率分別為81.54%，82.50%，83.11%，噻氯匹定的絕對回收率為85.50%；氯吡格雷低、中、高三個濃度的日內精密度RSD分別為5.5%，2.6%，4.5%，日間精密度RSD分別為5.7%，4.0%，4.5%，CAMD低、中、高三個濃度的日內精密度RSD分別

9、為1.6%，6.2%，4.7%，日間精密度 RSD分別為6.0%，8.7%，5.3%；氯吡格雷、CAMD血漿樣品于-40℃低溫保存一個月及反復凍融三次后性質穩(wěn)定，且處理后的血漿樣品于室溫放置8h對測定無影響。
　　對照組大鼠體內CAMD的主要藥動學參數如下：AUC0-t：20574.45±5451.02ng/mL·min，AUC0-∞：21532.80±6223.07ng/mL·min，Cmax：207.50±79.33ng/mL

10、，Tmax：45.00±8.02min，t1/2：147.11±70.92min，CL：0.38±0.16L/min/kg，V：76.02±27.96L/kg。合用溶栓膠囊后，大鼠體內CAMD的主要藥動學參數如下：AUC0-t：22584.72±8754.93ng/mL·min，AUC0-∞：23705.66±9089.06ng/mL·min，Cmax：184.00±58.91ng/mL，Tmax：50.62±11.16min，t1/2

11、：150.69±35.81min，CL：0.36±0.15L/min/kg，V：79.29±37.18L/kg。合用血脂康膠囊后，大鼠體內CAMD的主要藥動學參數如下：AUC0-t：15338.44±2958.96ng/mL·min，AUC0-∞：17989.99±5221.61ng/mL·min，Cmax：181.04±57.84ng/mL，Tmax：28.12±9.98min，t1/2：211.27±66.40min，CL：0.44

12、±0.10L/min/kg，V：129.78±30.34L/kg。合用心元膠囊后，大鼠體內CAMD的主要藥動學參數如下：AUC0-t：19585.22±8037.93ng/mL·min，AUC0-∞：21615.22±10084.68ng/mL·min，Cmax：225.25±50.81ng/mL，Tmax：38.12±9.98 min，t1/2：181.96±73.68 min， CL：0.40±0.14 L/min/kg，V：98.

13、69±44.23 L/kg。合用松齡血脈康膠囊后，大鼠體內 CAMD的主要藥動學參數如下：AUC0-t：17804.36±6443.45ng/mL·min，AUC0-∞：19812.59±6111.02ng/mL·min，Cmax：143.12±53.63ng/mL，Tmax：43.75±13.56min，t1/2：217.56±132.35min，CL：0.41±0.14L/min/kg，V：140.13±118.15L/kg。與對照

14、組相比，合用血脂康膠囊后藥動學參數AUC0-t，Tmax明顯減小（P<0.05），t1/2，V明顯增大（P<0.05），且差異具有統計學意義；而合用溶栓膠囊、心元膠囊、松齡血脈康膠囊前后藥動學參數變化無統計學意義（P>0.05）。
　　結論：本文所建立的LC-MS/MS測定氯吡格雷活性代謝產物的方法簡便、準確、靈敏度高、重現性好，適用于大鼠體內血漿中氯吡格雷活性代謝產物濃度的測定。
　　合用血脂康膠囊后，活性代謝產物的暴露量