丙戊茶堿抑制脊髓JNK信號通路活化對大鼠趾部切口痛緩解作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討JNK信號通路在大鼠趾部切口痛中的作用及丙戊茶堿(PPF)對該模型大鼠鎮(zhèn)痛效應與JNK信號通路的相關關系。
　　方法：成年雄性SD大鼠150只，體重200～250g,依照隨機數(shù)字表法分為5組（n=30）：IP組（切口組），行趾部切口術；DMSO組（10％DMSO組），術前30min鞘內注射10%DMSO10μl；NS組（生理鹽水組）,術前30min鞘內注射0.9%生理鹽水10μl；SP組（SP600125組），術前30m

2、in鞘內注射SP60012525μg/10μl；PPF組（丙戊茶堿組），術前30min鞘內注射丙戊茶堿10μg/10μl。于趾部切口術前24h、術后2、6、24、48、72h行機械縮痛閾（MWT）、熱痛閾(TWL)測試；在術前24h、術后6、24、48、72h行為學測試后取大鼠腰膨大，應用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA法）測TNF-α含量，免疫熒光標記染色法觀察p-JNK分布及表達，免疫熒光雙染色標記法觀察 p-JNK與腰膨大背角小膠質細

3、胞、星形膠質細胞及神經(jīng)元的共表達情況；于術后72h進行Western blot檢測腰膨大p-JNK的表達量；將所得結果進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：⑴行為學研究：與術前24h比較，各組術后各時間點MWT、TWL均降低（P<0.05），SP組術后72h無明顯差異(P>0.05)；與IP組比較，SP組、PPF組術后各時間點MWT、TWL均升高（P<0.05）；與SP組比較，PPF組術后2h MWT較低（P<0.05）,術后6h TWL時

4、長較短（P<0.05），但其他各時間點上二組變化相似。⑵ELISA法腰膨大TNF-α水平檢測：與術前24h比較，各組術后各時間點TNF-α均明顯升高，于術后6h達峰（P<0.05）；與IP組比較，SP組、PPF組在術后各時間點腰膨大TNF-α含量明顯降低（P<0.05）；與SP組比較，PPF組在術后各時間點腰膨大TNF-α含量稍高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。⑶免疫熒光觀察腰膨大p-JNK的表達與分布：與術前24h比較，IP組、S

5、P組術后6、24、48、72h脊髓p-JNK陽性細胞數(shù)均增加（P<0.05）；與IP組比較，SP組在術后6、24、48、72h脊髓p-JNK陽性細胞數(shù)均減少（P<0.05）。免疫熒光染色顯示p-JNK術后6h即有表達，至術后72h升至最高。免疫熒光雙染色共表達式結果顯示,切口痛模型大鼠脊髓腰膨大中p-JNK主要與小膠質細胞標記物(Iba-1)共表達。⑷Western blot檢測術后72h腰膨大 p-JNK的相對含量：與術前24h比較，

6、術后72h IP組、PPF組脊髓p-JNK含量升高(P<0.05)，SP組含量減少（P<0.05）；與IP組比較，SP組和PPF組在術后72h脊髓p-JNK含量均減少（P<0.05）；與SP組比較，PPF組在術后72h腰膨大處p-JNK含量較多（P<0.05）。
　　結論：①脊髓JNK信號通路活化對大鼠趾部切口痛的產(chǎn)生和維持有促進作用，通過鞘內注射 JNK信號通路特異性抑制劑可翻轉手術切口誘發(fā)的痛覺過敏和痛覺超敏；②抑制JNK信號