基于定量蛋白質組學研究OLFM4在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制.pdf

1、目的：胃癌是危害人類健康的常見惡性腫瘤之一，名列全球第五大常見腫瘤。據最新統計，全球每年新發(fā)病例約95萬人，死亡約72萬人。胃癌病人的預后與腫瘤分期密切相關，而腫瘤的分期與腫瘤浸潤深度、局部淋巴結和遠端臟器是否轉移相關。目前胃癌的發(fā)病及轉移的機制尚不明確。因此深入研究胃癌的發(fā)生及轉移機制顯得尤為重要。近年來，蛋白質組學技術的快速發(fā)展為我們研究疾病的發(fā)病機制提供了強有力的工具。本研究旨在運用同位素標記的相對和絕對定量技術（iTRAQ）尋找

2、與胃癌發(fā)病相關的蛋白，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制。
　　方法：本研究運用iTRAQ技術對胃癌組織和癌旁組織進行定量蛋白質組學研究，收集15例胃癌病人的胃癌組織和癌旁組織，通過iTRAQ篩選出胃癌組織和癌旁組織中差異表達的蛋白分子。從篩選出的蛋白分子中進一步選出幾個蛋白，運用免疫印跡、實時定量PCR驗證在蛋白水平、RNA水平差異蛋白的表達情況，并且用組織芯片進行免疫組化染色在組織水平驗證差異蛋白的表達。然后運用胃癌細胞株模型，

3、利用小干擾RNA技術特異性的下調蛋白的表達后觀察其對胃癌細胞株生物學行為的影響。
　　結果：通過iTRAQ技術以及質譜分析，共篩選出了134個差異表達的蛋白，其中51個蛋白上調，83個蛋白下調。通過免疫印跡和實時定量PCR驗證了AZU1、CPVL、OLFM4、VIL1等差異蛋白的表達，發(fā)現 AZU1、CPVL、OLFM4、VIL1在胃癌組織的表達明顯高于癌旁組織，免疫組化檢測也有同樣的結果。結果與iTRAQ結果一致。從差異蛋白中篩

4、選出 OLFM4進行下一步的研究，在兩株胃癌細胞AGS、MKN28中通過小干擾RNA技術下調胃癌細胞株中OLFM4的表達。結果發(fā)現胃癌細胞株中OLFM4的表達下調后，胃癌細胞的增殖生長能力，遷移和侵襲能力均明顯降低。
　　結論：本研究成功的運用了定量蛋白質組學方法篩選胃癌組織與癌旁組織中差異表達的蛋白，通過進一步的驗證表明iTRAQ技術的結果是可靠的。同時也發(fā)現過表達的OLFM4在胃癌的發(fā)病和轉移過程可能起了一定的促進作用，而降低