宮頸癌APE1與ZEB1和PD-L1相互作用及臨床意義研究.pdf

1、宮頸癌是嚴重危害我國婦女健康的惡性腫瘤之一。宮頸癌的復發(fā)和轉移是患者治療失敗的主要原因。上皮細胞向間質細胞的轉變即上皮-間質轉化(epithelial to mesenchymal transition，EMT)在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展發(fā)揮著重要作用[1，2]。EMT以上皮細胞極性的喪失及間質特性的獲得為重要特征，為上皮細胞獲得遷移能力的最主要的方式。脫嘌呤/脫嘧啶內切核酸酶1(APE1)不僅能修復DNA的損傷還具有氧化還原活性，激活許多轉

2、錄因子，在FIGO分期較高、分化越低、存在淋巴結轉移的患者APE1表達增高[3]，提示APE1參與了宮頸癌的進展。EMT作為腫瘤轉移的重要機制之一，研究證實在非小細胞肺癌中APE1參與調控了EMT[4]，然而在宮頸癌中APE1是否調控EMT及其調控的具體分子機制尚不完全清楚。因此本研究擬利用特異性抑制劑和基因敲除細胞株，通過運用蛋白功能位點突變、CO-IP、凝膠遷移電泳(EMSA)和免疫熒光以及裸鼠成瘤等技術，深入研究APE1在宮頸癌E

3、MT中具體分子機制，對進一步闡明宮頸癌侵襲轉移的機理以及今后可能的靶點干預具有重要的的科學意義。
　　免疫治療不僅在其它腫瘤治療中有著顯著的療效，同樣在宮頸癌中也顯示出了光明的前景。程序性死亡配體-1(PD-L1)為B7家族的一個成員，是由抗原呈遞細胞表達，具有抑制T淋巴細胞激活的功能。PD-L1通過與其受體結合，誘導T淋巴細胞無反應性和/或凋亡[5-8]。前期相關研究發(fā)現APE1與PD-L1在表達上存在相關性，且分別與腫瘤的轉移

4、存在關聯[9-12]。然而在宮頸癌中，至今尚未有文獻系統(tǒng)詳細報道早期宮頸癌中APE1和PD-L1的表達與年齡、淋巴結轉移和預后之間的關系。本研究中檢測了PD-L1和APE1在早期宮頸鱗癌組織中的表達情況，分析了兩者之間相關性及其臨床意義，為APE1與PD-L1可能存在的相互調控機制的研究提供臨床依據。
　　目的:
　　1.明確APE1是否參與調控宮頸癌EMT，探索APE1參與宮頸癌EMT的具體分子機制。
　　2.探討早

5、期宮頸鱗癌中APE1與PD-L1表達相關性以及與臨床病理因素的相關性。
　　3.在早期宮頸鱗癌中APE1與PD-L1表達具有相關性，兩者均高表達時早期宮頸鱗癌患者預后較差，APE1與PD-L1在早期宮頸鱗癌的進展中發(fā)揮了一定的作用。APE1與PD-L1的表達聯合檢測對早期宮頸鱗癌預后的評估具有潛在價值。
　　內容和方法:
　　1.APE1及其氧化還原功能對宮頸癌EMT的影響:以APE1SiRNA干擾宮頸癌細胞株APE1

6、表達以及APE1穩(wěn)定敲低型、氧化還原功能缺陷型細胞為研究對象，利用Western blot、免疫熒光、transwell實驗、劃痕實驗以及裸鼠實驗觀察APE1及其氧化還原功能對宮頸癌EMT的影響。
　　2.APE1與ZEB1相互作用的機制研究:利用HA標簽的APE1真核質粒以及FLAG標簽的ZEB1真核質粒、APE1SiRNA以及APE1redox功能抑制劑E3330等，運用免疫共沉淀的方法雙向驗證APE1與ZEB1相互結合，利用

7、電泳遷移實驗(EMSA)揭示APE1及其氧化還原功能可影響ZEB1與目的基因的結合能力，影響目的基因E-cadherin的表達。
　　3.APE1與PD-L1在早期宮頸鱗癌中的表達相關性及臨床意義:收集64例FIGO分期為Ⅰ期或Ⅱa期的并行手術治療的早期宮頸鱗癌患者臨床資料、隨訪信息以及手術組織標本。免疫組化染色APE1與PD-L1抗體，SPSS22.0統(tǒng)計軟件分析，APE1與PD-L1表達與臨床特征關系使用卡方檢驗，Spearm

8、an等級相關分析APE1與PD-L1表達相關性，患者生存時間使用Kaplan-Meier法分析，多因素采用Cox回歸評估各臨床病理參數對預后的相對危險度。
　　結果:
　　1.宮頸癌中APE1氧化還原功能調控ZEB1介導的EMT:APE1及其氧化還原功能可促進EMT的發(fā)生，增強了宮頸癌細胞的轉移能力，并且APE1與ZEB1可形成蛋白復合物，APE1的氧化還原功能并不調控ZEB1的表達，而是影響ZEB1的轉錄活性進而影響目的基

9、因E-cadherin的表達。
　　2.APE1與PD-L1在早期宮頸鱗癌中表達具有相關性且與宮頸癌的進展有關:早期宮頸癌患者APE1和PD-L1蛋白表達陽性率分別為70.31％和67.18％。PD-L1的表達與分期、淋巴結轉移有顯著相關性(P＜0.05)，而APE1的表達僅與淋巴結轉移密切相關(P=0.038)。另外，APE1與PD-L1的表達正相關(r2=0.347，P=0.005)，且兩者共表達與淋巴結轉移相關，其術后生存期