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文檔簡介
1、目的:探討重組人促紅細胞生成素(EPO)對玻璃體腔注射神經酰胺誘導大鼠視網膜視神經損傷的保護作用及其機制。
方法:SD大鼠隨機分為4組(6只/組):即正常對照組、DMSO處理組、神經酰胺2(C2)處理組和 C2+EPO(Erythropoietin,人促紅細胞生成素)治療組。通過玻璃體腔注射C2來誘導視網膜損傷,并且檢測玻璃體腔注射EPO對C2誘導視網膜損傷的保護作用。在C2+EPO治療組,SD大鼠C2玻璃體腔給藥三天后再通過
2、眼內注射 EPO進行治療。使用閃光視網膜電圖(f–ERG)來檢測經不同處理大鼠的視網膜功能、TUNEL法檢測視網膜細胞凋亡、TEER(Trans–endothelial Electrical Resistance)檢測人視網膜微血管內皮細胞(Human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs)的跨內皮電阻。并且采用免疫熒光和Q–PCR來檢測GFAP(Glial fibrillary
3、acidic protein,神經膠質酸性蛋白)和血–視網膜屏障(blood–retinal barrier,BRB)相關因子在R28細胞中轉錄水平(mRNA)的改變。
結果:相比于正常對照組和DMSO處理組,ERG的結果顯示,C2處理組的大鼠ERG b波波幅顯著降低;TUNEL結果表明,視網膜神經節(jié)細胞層(GCL)TUNEL陽性的細胞數(shù)量顯著增多;視網膜GFAP免疫熒光染色明顯增強,提示膠質細胞的活化增多。EPO治療后,ER
4、G b波振幅顯著升高、GFAP表達降低、活化的膠質細胞數(shù)量減少、GCL層的細胞凋亡顯著減少。體外研究顯示,R28細胞經C2處理后,細胞存活率顯著降低,并與C2呈劑量依賴性。C2能顯著降低原代人視網膜微血管內皮細胞間緊密連接的完整性,表現(xiàn)為跨內皮電阻(TEER)的降低,EPO治療能夠上調TEER。R28細胞經 C2處理48小時后,Q–PCR結果顯示質膜小泡相關蛋白(plasmalemma vesicle associated protei
5、n, PLVAP,PV–1)、集群分化因子73(cluster of differentiation73,CD73)和細胞間粘附分子1(intercellular adhesion molecule,ICAM–1)在轉錄水平(mRNA)的表達顯著增加,并且在EPO治療后顯著降低。
結論:C2眼內注射能引起視網膜損傷,主要通過升高PV–1、CD73和ICAM–1的表達來誘導的視網膜細胞凋亡和血–視網膜內屏障的破壞。初步實驗結果表
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