

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、肝臟是機體的重要代謝器官,其代謝活動受激素、酶類、代謝底物及周期節(jié)律等多種因素共同調節(jié),并且作為中心樞紐與肌肉、脂肪組織等多個器官進行代謝物質及代謝水平的緊密聯(lián)系,共同維持機體的運轉。伴隨機體飽食或饑餓等能量狀態(tài),肝臟進行分解或合成代謝等應答,將糖及脂類物質加工分解或合成儲存,最終維持機體的能量平衡。饑餓與飽食狀態(tài)會使機體的能量代謝發(fā)生顯著的變化。飽食狀態(tài)下,肝臟中糖原和TAG的合成、轉運增加,而饑餓狀態(tài)下,肝臟的糖原分解、糖異生、脂肪
2、酸氧化和酮體生成增顯著加。PPARα高表達于FA代謝旺盛的組織中,如肝臟、骨骼肌、棕色脂肪、心臟及腎臟中,屬于PPAR家族成員。PPAR家族是一類配體活化的轉錄因子,在脂和碳水化合物的代謝調節(jié)中發(fā)揮了重要作用。根據已有文獻報道,PPARα在饑餓狀態(tài)下的肝臟FAO及酮體生成中發(fā)揮重要作用,且饑餓時表達升高。CPT-1α,ACADM是FAO過程中的2種關鍵限速酶。CPT-1α介導了LCFA-CoA進入線粒體外膜,是FAO的第一步;而ACAD
3、M特異性催化C4-C12直鏈中鏈FA在線粒體中的β氧化。HMGCS2是催化酮體生成的關鍵限速酶。而這三種酶同時也是PPARα的直接下游靶基因,其表達均受PPARα轉錄上調。以往的肝臟能量代謝研究多關注PPARa的翻譯后修飾,包括乙酰化、磷酸化、泛素化、糖基化等,但其分子本身表達水平的調節(jié)研究較少。本研究從轉錄后調控水平探討了microRNA通過結合于PPARa3'UTR調節(jié)其表達,發(fā)現miR-21,miR-27a,miR-106b,mi
4、R-181a可以通過直接調節(jié)PPARa,參與饑餓狀態(tài)下肝臟的脂肪酸代謝。
目的:
[1]通過小鼠體內模型,檢測PPARα及microRNA在肝臟饑餓狀態(tài)中的表達變化,篩選潛在調控PPARα的microRNA;
[2]通過細胞模型,探討microRNA調控肝細胞脂肪酸代謝的作用;
[3]驗證microRNA對PPARα的調控機制;
方法及結果:
[1]在本研究中,我們首先通過小鼠
5、饑餓及饑餓再進食模型,獲取肝組織,發(fā)現與正常飲食對照組小鼠相比饑餓24h后小鼠肝組織中出現較多的脂滴堆積,油紅O染色呈紅色陽性著色。當小鼠饑餓24h再進食24后,肝組織中脂滴,顯著減少,趨于正常。通過qRT-PCR的方法檢測其內源性PPARα及其下游參與FAO及酮體生成過程的關鍵限速酶CPT-1α,HMGCS2,ACADM的mRNA表達變化,實驗結果與文獻一致,隨小鼠饑餓,PPARα及其下游基因顯著升高,而小鼠再進食后其表達恢復至接近正
6、常水平。而4種候選microRNA的變化則與之呈負相關,提示,這些microRNA可能參與了饑餓狀態(tài)下肝臟中脂肪酸代謝調控。
[2]隨后我們用4種microRNA特異性的mimics轉染人肝癌細胞系HegG2,同時進行低糖誘導饑餓模型處理。運用qRT-PCR檢測在此模型下PPARα及其下游基因,以及糖異生的限速酶G6Pase的mRNA表達,同時western blot實驗檢測了PPARα的蛋白表達,發(fā)現HepG2細胞饑餓模型中
7、,200mg/L的低糖處理顯著升高以上基因mRNA的表達。而轉染針對4種microRNA的mimics后,其mRNA升高受到顯著抑制,且表達趨于正常水平,甚至低于正常對照。western blot與之一致,提示,miR-21,miR-27a,miR-106b,miR-181a可能是通過調節(jié)PPARα參與了饑餓條件下肝細胞的脂肪酸代謝。
[3]最后,我們證實了miR-21,miR-27a,miR-106b,miR-181a的特異
8、性inhibitor可以上調HepG2細胞中PPARα及其下游基因CPT-1a和ACADM mRNA的表達變化。qRT-PCR結果顯示,4種microRNA的干涉,均可顯著上調以上基因的表達,雖然抑制miR-21的上調效果雖較低,但仍具有統(tǒng)計學意義。另外通過生物信息學預測,發(fā)現miR-21,miR-27a,miR-106b,miR-181a在PPARα3'UTR有潛在結合位點,隨后我們克隆了PPARα3'UTR上兩段富含microRNA
9、識別序列的片段,通過熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng),證實了4種microRNA可以通過直接結合于PPARα3'UTR,從而在轉錄后水平調控PPARα的表達。
結論:本研究從轉錄后調節(jié)角度出發(fā),探討了PPARα在饑餓狀態(tài)下肝臟脂肪酸代謝中的功能受miR-21,miR-27a,miR-106b,miR-181a調節(jié)。通過qRT-PCR、western blot等方法驗證PPARα在饑餓小鼠肝組織中顯著上調,且隨再進食其表達降低。4種mi
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 脂肪酸代謝
- 飼料脂肪酸對OLETF大鼠血清磷脂脂肪酸組成和糖代謝的影響.pdf
- 不同配比的功能性脂肪酸對攝入反式脂肪酸大鼠的血脂及組織脂肪酸代謝的影響.pdf
- 脂多糖對奶山羊肝臟葡萄糖及脂肪酸代謝的影響.pdf
- 中鏈脂肪酸對小鼠膽固醇代謝的調節(jié)及其機制研究.pdf
- 紫球藻脂肪酸代謝調控.pdf
- 花色苷對脂肪細胞脂肪酸代謝的影響及其機制探討.pdf
- 中鏈脂肪酸對肥胖小鼠脂代謝的調節(jié)作用及機制研究.pdf
- 多不飽和脂肪酸日糧對蛋雞脂類代謝及蛋黃脂肪酸組成的影響.pdf
- 日糧添加豆油和胡麻油對脂肪酸消化代謝和牛奶中脂肪酸組成的影響.pdf
- 丙酮酸鈣對大鼠脂肪酸代謝的影響及機理研究.pdf
- 飼料脂肪酸調控大黃魚免疫力和脂肪酸代謝的初步研究.pdf
- 不同精粗比日糧對奶山羊養(yǎng)分消化及瘤胃、肝臟脂肪酸代謝的影響.pdf
- 脂肪酸代謝影響HBV清除的初步研究.pdf
- PPARγ激活對GDM小鼠胎盤脂肪酸運輸蛋白表達水平的影響.pdf
- 線蟲脂肪酸代謝與性別決定研究.pdf
- 不同精粗比日糧對奶山羊瘤胃、PDV組織和肝臟脂肪酸代謝的影響.pdf
- 枸杞多糖通過PPARγ調節(jié)脂肪細胞功能的機制研究.pdf
- 高脂飲食對老年大鼠骨骼肌和肝臟脂肪酸代謝及AMPK信號通路的影響.pdf
- 蠶蛹提取物對高脂大鼠肝臟脂肪酸譜的影響.pdf
評論
0/150
提交評論