釀酒酵母菌重要蛋白質HMO2的初步晶體學研究.pdf

1、背景：高速泳動族蛋白(HMGB)是一類廣泛存在于真核生物的非組蛋白家族，有著高度保守的三維結構，在轉錄調控、DNA修復、基因重組、細胞分化和胞外信號轉導等過程中扮演著重要的角色。作為HMGB蛋白質超家族的成員之一，HMO2在進化上高度保守且分布廣泛提示該蛋白質具有重要的生物學功能，如ATP依賴性染色體重建、DNA損傷修復等。目前，釀酒酵母菌HMO2蛋白的三維結構還沒有得到解析，其具體的功能機制也尚不清楚。
　　目的：解析釀酒酵母菌

2、重要蛋白質HMO2的三維結構，并基于其結構研究功能，進而了解其具體的功能機制，為進一步的染色體重建和DNA損傷修復研究打下基礎。
　　方法：將HMO2基因重組到pET22b載體上，構建pET22b-HMO2重組表達質粒，用大腸桿菌原核表達系統表達該蛋白，通過金屬離子親和層析柱(Ni-NTA)、陰離子交換層析(Resource Q)和凝膠排阻層析（分子篩Superdex200）進行純化，得到足夠純度的目的蛋白。用分子篩分析蛋白在溶液

3、中的聚集狀態(tài)。通過氣相擴散法，培養(yǎng)蛋白質晶體，用X-射線衍射儀收集晶體衍射數據，再進行數據分析處理以解析晶體三維結構。
　　結果：通過分子克隆技術成功構建了重組質粒pET22b-HMO2;通過蛋白表達純化相關技術成功獲得了純度達98％的目的蛋白質HMO2;凝膠排阻層析(Superdex200)結果顯示HMO2蛋白質在溶液中以二聚體形式存在。培養(yǎng)出晶型好、偏光能力強的母體蛋白質單晶。在上海同步輻射光源收到晶體的衍射數據以供結構解析使